奧林巴斯CX33顯微鏡明場與相差觀察酵母、細(xì)菌的方法及要點(diǎn)

奧林巴斯CX33顯微鏡是一款正置生物顯微鏡，支持明場（Brightfield, BF）和相差（Phase Contrast, PC）兩種觀察模式，適用于酵母、細(xì)菌等微生物的形態(tài)學(xué)研究。以下從觀察原理、操作步驟、注意事項(xiàng)等方面展開分析：

一、明場觀察酵母與細(xì)菌

1. 原理
明場觀察通過透射光直接成像，適合觀察染色或高對比度樣本（如細(xì)菌涂片染色、酵母細(xì)胞固定后染色）。酵母細(xì)胞較大（約5-10μm），細(xì)菌較小（約0.5-5μm），明場下需高倍物鏡（如40X、100X）和良好調(diào)焦才能清晰觀察。

2. 操作步驟

• 樣本制備：

• 細(xì)菌：取菌液涂片，熱固定后染色（如革蘭氏染色），滴加香柏油。

• 酵母：取酵母液涂片，固定后染色（如美藍(lán)染色），滴加香柏油。

• 顯微鏡設(shè)置：

• 切換至明場模式，選擇10X目鏡和40X或100X物鏡。

• 調(diào)節(jié)光源亮度至適中，粗調(diào)焦后微調(diào)至清晰。

3. 觀察要點(diǎn)

• 細(xì)菌：觀察形態(tài)（桿狀、球狀）、排列方式（鏈狀、簇狀）及染色特性（革蘭氏陽性/陰性）。

• 酵母：觀察細(xì)胞形態(tài)（橢圓形、圓形）、出芽生殖及細(xì)胞內(nèi)含物（如淀粉粒）。

4. 優(yōu)缺點(diǎn)

• 優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，適合染色樣本。

• 缺點(diǎn)：未染色樣本對比度低，細(xì)菌觀察困難。

二、相差觀察酵母與細(xì)菌

1. 原理
相差觀察通過物鏡和聚光鏡中的相差環(huán)（Phase Ring）將光程差轉(zhuǎn)化為振幅差，增強(qiáng)未染色透明樣本的對比度。適合觀察活細(xì)胞或未染色樣本（如酵母培養(yǎng)液、細(xì)菌懸液）。

2. 操作步驟

• 樣本制備：

• 細(xì)菌：取新鮮菌液，滴加至載玻片，蓋上蓋玻片（避免氣泡）。

• 酵母：取酵母培養(yǎng)液，滴加至載玻片，蓋上蓋玻片。

• 顯微鏡設(shè)置：

• 切換至相差模式，安裝相差物鏡（如10X、40X）和相差聚光鏡。

• 調(diào)節(jié)光源亮度至適中，粗調(diào)焦后微調(diào)至清晰。

3. 觀察要點(diǎn)

• 細(xì)菌：觀察運(yùn)動(dòng)性、形態(tài)（如弧菌的彎曲狀）及細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)（如核區(qū)）。

• 酵母：觀察出芽生殖、假菌絲形成及細(xì)胞內(nèi)顆粒（如肝糖粒）。

4. 優(yōu)缺點(diǎn)

• 優(yōu)點(diǎn)：無需染色，可觀察活細(xì)胞動(dòng)態(tài)。

• 缺點(diǎn)：背景較亮，需調(diào)節(jié)光源亮度；高倍物鏡下相差環(huán)易偏移，需重新對焦。

三、奧林巴斯CX33顯微鏡的操作建議

1. 物鏡選擇：

• 明場觀察：建議使用40X或100X油鏡（需滴加香柏油）。

• 相差觀察：建議使用10X或40X相差物鏡（無需油鏡）。

2. 光源調(diào)節(jié)：

• 明場觀察：光源亮度調(diào)至中等，避免過亮導(dǎo)致染色樣本褪色。

• 相差觀察：光源亮度調(diào)至較低，增強(qiáng)對比度。

3. 調(diào)焦技巧：

• 相差觀察時(shí)，需先在低倍（10X）下找到細(xì)胞，再切換至高倍（40X）。

• 高倍物鏡下，微調(diào)焦距時(shí)需緩慢旋轉(zhuǎn)，避免細(xì)胞移出視野。

四、常見問題及解決方案

五、總結(jié)

• 明場觀察：適合染色樣本，操作簡單，但未染色樣本對比度低。

• 相差觀察：適合未染色或活細(xì)胞樣本，可增強(qiáng)對比度，但需調(diào)節(jié)光源和相差環(huán)。

• 奧林巴斯CX33優(yōu)勢：支持明場與相差雙模式，操作便捷，適合微生物形態(tài)學(xué)研究。

通過合理選擇觀察模式和優(yōu)化操作步驟，可高效利用CX33顯微鏡觀察酵母與細(xì)菌的形態(tài)特征。